Solubilization and partial purification of the plasma membrane ATPase of Rhodotorula glutinis الإذابة والتنقية الجزئية لإنزيم الأتيبيز من الغشاء البلازمي لخميرة الرودوتيلا جليتينس

Abstract

الظروف القصوى لإذابة إنزيم الأتيبيز من الغشاء البلازمي لخميرة الرودوتيلا جليتينس بالمذيب (Z314) ذي الأيونات المزدودة كانت 055 مليجرام مل (5 × التركيز الحرج لتكوين المايسيل) للمذيب (Z314)، عند درجة حرارة الغرفة في وجود 1 ملي مولار من الأدينوسين ثلاثي الفوسفات، و 40 % (حج حجم) من الجليسرول، و1125 من كبريتات الأمونيوم، و 4 مي مولار من 2ميركابتو أيثانول، و 1 ملي مولار من مثبط البروتيزات (PMsF) في 01 مولار من المحلول المنظم MesTris عند الأس الهيدروجيني 65 ثم بعد ذلك تعريض المحلول لموجات صوتية فيحمام مائي صوتي لمدة 6 دقائق تمت تنقية الأنزيم المذاب 4 درجات باستخدام عملية الطرد المركزي المستمر للمستخلص المذاب في (Z314) من خلال التراكيز المختلفة للجليسرول (2050 %، حجم حجم )

The optimal conditions for solubilization of the ATPase activity from the plasma membrane of Rhodotorula glutinis by zwitterionic detergent Z314 were found to be 055 mg ml (5X cmc) of Z 314 at room temperature in the presence of 1 mM ATP 40 % (v v) glycerol 1125 % ammonium sulfate 5 mM 2mercaptoethanol 1 mM PMSF in 01 M MesTris pH 65 followed by sonication in a water bath sonicator for 6 min A 4fold purification of the solubilized ATPase activity was obtained by centrifugation of the Z314 extract through a glycerol gradient (2050 % v v)