Biological serological and molecular identification of lettuce mosaic virus from field infected in Saudi Arabia تعريف فيروس موزاييك الخس بالطرق البيولوجية والسيرولوجية والجزيئية من نباتات خس مصابة حقليا في المملكة العربية السعودية

Abstract

شوهدت أعراض موزاييك على نباتات خس (Lactuca sativa linn) في حقول الحاير بمنطقة الرياض تم استخدام اختبار الإليزا للكشف عن وجود المسبب الفيروسي المتسبب في حدوث هذه الأعراض وذلك باستخدام أمصال لعدة فيروسات يشك في تسببها في تكشف هذه الأعراض تفاعلت الأجسام المضادة الخاصة بفيروس موزاييك الخس إيجابيا في اختبار الإليزا، بينما لم تشاهد أي تفاعلات مصلية للفيروسات الأخرى التي تصيب الخس والتي شملت فيروس موزاييك البرسيم (AMV)، وفيروس موزاييك الخيار (CMV)، وفيروس موزاييك اللفت (TuMV)، وفيروس تبقع وذبول الطماطم (TSWV) تكشفت أعراض على نباتات الخس L Sativa، والمخلدة Gomphrena globosa، ونوعان من الزريح Chenopodium amaranticolor Coste & Reyn، وC quinoa التي أعديت ميكانيكيا بعصارة من أوراق الخس التي شوهدت عليها الأعراض لم تظهر أعراض على نوعي التبغ Nicotiana glutinosa وN tabaccum عند إعدائهما بعصارة خام من نفس أوراق نبات الخس المصاب بالفيروس استخدم اختبار تفاعل البلمرة المتسلسل العكسي النسخ (RTPCR) للكشف عن الفيروس وتعريفه من مستخلص الحمض النووي الريبوزي لنباتات خس مصابة وذلك باستخدام بادئ متخصص للكشف عن المنطقة "2" التي تشتمل على بداية الطرف 5 لجين الغلاف البروتيني بالإضافة إلى الطرف 3 لجين الأجسام المحتواة النووية من النوع B (Nib) قدر الحمض النووي (DNA) الناتج من تفاعل الـ RTPCR المضاعف بما يعادل 346 زوجا من القواعد النيوكليوتيدية وذلك باستخدام الفصل الكهربائي على الأجاروز تم تنقية قطعة DNA لعزلة فيروس موزاييك الخس التي حجمها 346 كما تم تحديد التتابع النيوكليوتيدي لها في هذه المنطقة أوضحت مقارنة تحليل التتابع النيوكليوتيدي أن هناك تماثلا بنسبة 924 إلى 988 % بين عزلة فيروس موزاييك الخس قيد الدراسة والعزلات التي سجلت في البرازيل وفرنسا والصين وأدران وسلالة AF199 وسلالة E أوضحت نتائج التتابع النيوكليوتيدي أن التماثل بين عزلة السعودية والعزلات المذكورة أعلاه كان متقاربا جدا يعتبر هذا أول تسجيل لفيروس موزاييك الخس في المملكة العربية السعودية

Mosaic symptoms were observed on field grown lettuce (Lactuca sativa Linn) plants at AlHair area in Riyadh region Double antibody sandwishenzyme linked immunosorbent assay (DASELISA) was used to detect the causal virus in the infected sap using antisera against some lettuce viruses Polyclonal antibodies specific to Lettuce mosaic virus (LMV) reacted positively while no reaction was observed with any of the other tested viruses including Alfalfa mosaic virus (AMV) Cucumber mosaic virus (CMV) Turnip mosaic virus (TuMV) and Tomato spotted wilt virus (TSWV) As a result of inoculation with crude sap extracted from diseased lettuce leaves L sativa G globosa Chenopodium amaranticolor Cost and Reyn and C quinoa plants showed some viruslike symptoms while D stramonium N glutinosa and N tabacum showed no symptoms Reverse transcriptionPolymerase chain reaction assay (RTPCR) was used for the detection and identification of the virus from nucleic acid extracts of infected lettuce plants using specific primer for the detection of the 3 end of the NIb gene together with the 5 end of the CP gene (region II) The viral DNA amplified product was approximately 346 bp as estimated by agarose gel electrophoresis The 346 bp DNA fragment from LMV isolate was purified and sequenced The comparative nucleotide sequence analysis showed 924 to 988 % similarity with LMV isolates recovered from Brazil France China Audran AF199 and strain E These results may suggest that the nucleotide sequence homology between the Saudi Arabian isolate and the French Chinese and Brazilian isolates are closely related This is the first report of LMV on lettuce in Saudi Arabia